分光光度法的原理

分光光度法的原理

分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。

根据朗伯（Lambert）-比尔（Beer）定律，当一束强度为I0的单色光垂直照射某物质的溶液后，由于一部分光被体系吸收，因此透射光的强度降至I，则溶液的吸光度A为：

A=abc

式中，A为吸光度；b为溶液层厚度，cm；c为溶液的浓度，g/dm3；a为吸光系数。其中吸光系数与溶液的本性、温度以及波长等因素有关。溶液中其他组分（如溶剂等）对光的吸收可用空白液扣除。

由上式可知，当固定溶液层厚度l和吸光系数a时，吸光度A与溶液的浓度呈线性关系。在定量分析时，首先需要测定溶液对不同波长光的吸收情况（吸收光谱），从中确定最大吸收波长，然后以此波长的光为光源，测定一系列已知浓度c溶液的吸光度A，作出A～c工作曲线。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法，称为分光光度法，也称为吸收光谱法。

分光光度法的应用光区包括紫外光区（200～400nm），可见光区（400～760nm），红外光区［2.5～25μm（按波数计为4000～400cm-1）］。用紫外光源测定无色物质的方法，称为紫外分光光度法；用可见光光源测定有色物质的方法，称为可见光光度法；用红外光源测定物质的方法，成为红外分光光度法。

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